Triage TM is een gedeponeerde handelsnaam van een test waarop gelijktijdig 8 soorten drugs worden opgespoord. exclusief" slaat op de innovatieve methode die gebaseerd is op de specifieke immunologische binding met 21 monoklonale antilichamen. Die binding wordt bij een positieve test zichtbaar door colloïdaal goudconjugaat dat scherp paars kleurt. 

Met Triage TM kan men op 15 minuten tijd de aanwezigheid ( of afwezigheid) van drugs vastellen met een zeer grote zekerheid, dit noemen wij "screenen". Indien U exact wil weten welk product en in welke concentratie het aanwezig is , dan moet het urinestaal verder onderzocht worden met een zogenaamde confirmatietest met name GC/MS(gaschromatografie /massaspektrometrie). 

Onderzoekmateriaal. 

Opsporen van drugs in de vorm van een screening is het gemakkelijkst uit te voeren op een urinestaal. Hier zijn de concentraties veel hoger dan bv. in bloed en zijn de verschillende drugmetabolieten beter aantoonbaar. 

Wanneer de urine afnemen?. 

Ten vroegste 1 uur na inname van drugs kan men sporen in de urine terugvinden. De koncentratie bij occasionele gebruikers is vaak niet hoog genoeg om te detecteren. Bij regelmatig druggebruik is de urine- drug-concentratie meestal voldoende hoog en is het tijdstip van urine-afname ondergeschikt. 

Sporen van drugs en drugmetabolieten vindt men tot verschillende dagen nadien nog terug; barbituraten(Phenobarbital), benzodiazepines en cannabinoiden zijn nog na 1 week en zelfs later op te sporen. 

Hoeveel urine is nodig?. 

Een volledig drugonderzoek met Triage TM hoeft slechts 0.14 ml urine. Het is zeer aan te bevelen om minimum over 20 ml urine te beschikken voor een eventuele, later uit te voeren, confirmatietest in een erkend toxicologisch laboratorium. 

Zijn er speciale eisen gesteld bij de afname van het urinestaal?. 

In de eerste plaats moeten wij zeker zijn dat het staal " zuiver " urine is. Een eenvoudig hulpmiddel is het meten van de temperatuur na de afname van het urinestaal( temp >30 °C). De urine kan mogelijk vervalst worden door verdunning of door het toevoegen van vreemde producten zoals zeep, toiletproducten, peroxiden, .... 

Vervalsing door verdunning leidt tot concentratieverlies zodat sommige drugs onder de detectielimiet vallen(test van 

urinekreatinine- 24 uurs urine). Vervalsing met zeep, toiletproducten wordt meestal ontdekt door Triage TM, de NEG.KONTROLE op de cassette zal in dit geval verkleuren. 

Speciale voorzorgen moeten NIET genomen worden zoals: 

-steriele afname 

-midstraal-urine 

-zuur toevoegen 

-bewaarmiddel toevoegen 

Belangrijk is het urinepotje duidelijk met onuitwisbaar etiket te identificeren en eventueel te verzegelen bij het opsturen. 

Identificatie van de persoon zoals ouderdom, gewicht, geslacht,grootte zijn niet relevant voor het analytisch resultaat, maar wel belangrijk voor een latere interpretatie of bevestiging. 

Tabel1: Parameters en positiviteitslimieten("Cut-off"). 
  

Principe en uitvoering van de test. 

Al de vereiste reagentia voor de uitvoering van de test zijn verwerkt in de cassette; in het bovenste gedeelte (vloeibare fase) bevinden zich 21 monoklonale antilichamen gericht tegen 8 drugcategorieën, de drugconjugaten gebonden aan colloïdaal goud en de buffer, onder vorm van 3 gelyofiliseerde microbeads. 

Het onderste gedeelte bevat een detectiemembraan(vaste fase) waarin, naast de naam van de drug, groepen van antilichamen zijn ingeplant. Een urinestaal van 140 ul wordt in het bovenste putje gebracht en gaat in oplossing met de 3 gelyofiliseerde microbeads. Laat 10 minuten staan bij kamertemperatuur. Tijdens deze incubatieperiode gebeurt er een competitieve reactie tussen de eventuele aanwezige endogene drug en het respektievelijk conjugatie gemerkt met 

colloïdaal goud, om zich op het vrije antilichaam te binden. 

Daarna wordt dit creatiemengsel vanuit het putje overgebracht op de detectiezone. Na het spoelen, met 3 druppels van het wasflesje, is een positief resultaat onmiddellijk zichtbaar door het ontstaan van een duidelijke paarse band naast de naam van de respektievelijke drug(s). De vrije colloïdale goudconjugaten die zich niet konden binden tijdens de incubatie, omdat alle antilichamen met drug bezet zijn, hebben zich dan hier gebonden met antilichamen van de vaste fase. 

Indien de drugconcentratie lager is dan de cut-off waarde, zal er geen kleurband verschijnen en wordt de test negatief verklaard. Gelijktijdig loopt er een ingebouwde positieve en negatieve controle mee, voor de beoordeling van de geldigheid van de cassette en de procedure en om alle eventuele valse of vervalste reacties uit te sluiten(H2O2,azijnzuur,detergenten, enz...) 

Beoordeling. 

Een paarsrode gekleurde strook naast de naam wijst erop dat drugs aanwezig zijn van die groep. De intensiteit van de kleur is niet belangrijk. De kleurband is zowat 10 min stabiel. De POS.controle moet altijd kleuren, de NEG. controle niet. 

De specificiteit van Triage TM is zeer hoog en sluit in grote mate vergissingen uit, zowel voor positieve als voor negatieve urines. In elke verpakking is er een tabel aanwezig met de vergelijking van resultaten met andere commerciële immunoassay's en GC/MS. Zuiver kwantitatief onderzoek in drugscreening is moeilijk haalbaar. Er is in eerste instantie gekozen voor het erkennen van zoveel mogelijk verschillende drugs en drugmetabolieten. Een kwantitatief rapport is immers afhankelijk van wisselende parameters zoals het tijdstip van inname, de diurese, het gewicht en het erkennen van alle metabolieten. 

De Triage TM cassette is vooral specifiek voor de opsporing van benzodiazepines, opiaten en cannabis die in opgeloste vorm in de urine uitgescheiden worden als glucoronide-conjugaat. Zo is bvb. oxazepam-glucuronide(300 ng/ml) gemakkelijk op te sporen dan de parent-drug oxazepam(1500 ng/ml). 

De Triage TM test cocaïne bepaalt voornamelijk de benzoylecgonine metaboliet. 

De Triage TM test amphetamine/methamphetamine is bijzonder gevoelig voor de d-vormen terwijl de l-vormen (bv. L-methamphetamine uit nasale spray) veel moeilijker te zien zijn. De designerdrugs MDA,MDEA en MDMA(Ecstasy) zijn eveneens op te sporen. 

De Triage TM test opiaten is zeer gevoelig voor het belangrijkste heroïnemetaboliet (6-acetyl-morphine) en voor morphine-3-glucuronide, dat later optreedt. 

De "cut-off" koncentratie van 100 ng/ml voor de test cannabis is conform aan de NIDA richtlijnen en laat een onderscheid toe tussen actieve en passieve cannabis gebruikers. Onze "cut-off" waarde van cannabis is op Triage TM 50 ng/ml, om nog beter te controleren met referentiemethoden. 

Besluit. 

Triage TM heeft een goede discriminatie van positieve en negatieve resultaten in de nabijheid van de cut-off grens. 

De interne controle, POS. en NEG., staat garant voor de goede uitvoering en reagenstabiliteit. De monoklonale antilichamen hebben door hun affiniteit een hoge gevoeligheid en reproduceerbaarheid en daarbij een zeer lange houdbaarheid op kamertemperatuur. 

Ref: 

-Wetenschappelijke dienst-MERCK-BELGOLABO NV./SA.- 

Diagnostica,Overijse. 

-Clin.Chem. 40/3;373-380(1994), Robert L.Fitzgerald,Douglas A.Rexin, and David A.Herold. 

-Journal of Analytical Toxicology,Vol.17,July/August 1993. Alan H.B.WU and Shan S.Wong,Kent G.Johnson,James Callies and D.X.Shu,Willard E.Dunn and Steven H.Y.Wong. 

-Journal of Analytical Toxicology,Vol.18,May/June 1994. Thomas R.Koch an d Ronald L.Raglin. 

Scheree Kirk and John F.Bruni. 

Clin.Chem.38/9,1678-1684(1992)"Simultaneous detection of sevendrugs of abuse by the Triage TM panel for drugs of abuse.